Radioimmunological determination of pancreatic and gut glucagon in plasma

A radioimmunoassay has been developed for glucagon and the antibodies raised in rabbits were sensitive to 0.01 ng of glueagon in a volume of 100 μl, giving identical dilution curves for the two substances.

Abstract

A radioimmunoassay has been developed for glucagon. The antibodies raised in rabbits were sensitive to 0.01 ng of glueagon in a volume of 100 μl. The free and the antibody-bound125I-glucagon were separated by addition of ethanol or by paper chromatography on Whatman 3 MM. Two types of antisera were used: one that did not react, with gut GLI (glucagon-like immunoreactivity), and another one that reacted with both the pancreatic glucagon and the gut GLI, giving identical dilution curves for the two substances. Exogenous pan-creatic glueagon and gut GLI experienced a high degree of degradation during the preparation of plasma unless trasylol was added. A degradation of endogenous pancreatic and gut GLI could also be shown in the absence of trasylol. The damage to125I-glueagon occurring during incubation in plasma was eliminated by using an easy plasma extraction method yielding an approximately 80% recovery of pancreatic glueagon and gut GLI. Normal human fasting plasma extracts contained 0.26 ± 0.024 ng equiv, of pancreatic GLI and 0.38±0.048 ng equiv. of gut GLI (mean of 21 samples ± s.e.m.). During OGTT the pancreatic GLI decreased while the gut GLI increased. The specificity and validity of glueagon determinations are discussed. Es wurde eine radioirnmunologische Bestimmungsmethode für Glucagon entwickelt. Die bei Kaninchen erzeugten Antikörper sprachen bereits auf 0.01 ng Glueagon in einem Volumen von 100 μl an. Freies und antikörpergebundenes Glucagon warden durch Zusatz von Äthanol oder dureh Chromatographie auf What man 3 MM Papier getrennt. Zwei Antisera Typen wurden verwandt: Das sine reagierte nieht mit Darm GLI (Glucagon ähnliche Immunreaktivität), während das andere mit Panereas-Glueagon und mit Darm-GLI reagierte, wobei die Verdünnungskurven für beide Substanzen übereinstimmten. Exogenes Pancreas-Glueagon und Darm-GLI wurden bei der Präparation des Plasma stark abgebaut, werm kein Trasylol zugesetzt worden war. In Abwesenheit von Trasylol war auch sin Abbau yon endogenera Pancreas-Glueagon und Darm-GLI nachzuweisen. Die während der Inkubation in Plasma auftretende Denaturierung von125I-Glucagon ließ sich durch die Anwendung einer einfachen Plasma-Extraktionsmethode verhindern, die eine Wiederfindung yon 80% des Pancreas-Glueagons und der Darm-GLI erlaubte. Plasma-extrakte von Normalpersonen im Nüchternzustand enthielten 0.26±0.024 ng Äquival. Pancreas-Glucagon und 0.38±0.048 ng Äquival. Darm-GLI (Mittelwert von 21 Plasmaproben ± SEM). Während eines oralen GTT nahm die Pancreas-GLI ab, während die Darm-GLI anstieg. Die Spezifität und Aussagekraft der Glucagonmessungen werden diskutiert.